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一、技術(shù)簡(jiǎn)介CLIP(Cross-linkingimmunoprecipitation,交聯(lián)免疫共沉淀)通過結(jié)合UV交聯(lián)和免疫共沉淀的方法來分析蛋白與RNA相互作用的結(jié)合位點(diǎn)。二、技術(shù)原理CLIP技術(shù)利用紫外線照射使細(xì)胞內(nèi)的RNA與RNA結(jié)合蛋白(RBP)發(fā)生共價(jià)交聯(lián),隨后通過免疫沉淀的方法富集與特定RBP結(jié)合的RNA片段,再經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄和高通量測(cè)序等步驟,獲取RBP在體內(nèi)的RNA結(jié)合位點(diǎn)和結(jié)合序列信息。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.蛋白質(zhì)-RNA相互作用研究:確定特定蛋白質(zhì)在體內(nèi)的RNA結(jié)...
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一、技術(shù)簡(jiǎn)介RIP(RNAImmunoprecipitation,RNA免疫沉淀)技術(shù)是一種用于研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)方法,能夠揭示RNA結(jié)合蛋白(RBP)在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中的功能機(jī)制。二、技術(shù)原理RIP利用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來,通過分離純化,對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證或測(cè)序分析,結(jié)果更具生物學(xué)說服力。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.基礎(chǔ)機(jī)制:解析RNA結(jié)合蛋白(如AGO2、Polycomb復(fù)合物)的功能及RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。2....
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一、技術(shù)簡(jiǎn)介ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀)是一種研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的關(guān)鍵技術(shù),廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)鑒定、表觀遺傳修飾分析等領(lǐng)域。二、技術(shù)原理利用抗原抗體的特異性結(jié)合,將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來,能夠真實(shí)地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究:鑒定轉(zhuǎn)錄因子(如p53、NF-κB)的DNA結(jié)合位點(diǎn)。2.表觀遺傳學(xué):分析組蛋白修飾(如H3K27me3)在基因沉默中的作用。3.疾病機(jī)制:探索癌癥中異常蛋白(如MYC)的基因組結(jié)合模式。...
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一、技術(shù)簡(jiǎn)介IP(免疫沉淀,Immunoprecipitation)和Co-IP(免疫共沉淀,Co-Immunoprecipitation)是研究蛋白質(zhì)功能及相互作用的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。二、技術(shù)原理IP通過特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,利用抗體將靶標(biāo)蛋白(即抗原)分離出來,從而檢測(cè)某一種蛋白的表達(dá)情況;而CO-IP是在IP基礎(chǔ)上,驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用。通過捕獲一個(gè)蛋白(誘餌蛋白),檢測(cè)與其結(jié)合的互作蛋白(靶蛋白),從而特異性富集所研究的目的蛋白,進(jìn)...
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在細(xì)胞生物學(xué)研究、生物制藥等前沿領(lǐng)域,細(xì)胞培養(yǎng)基為細(xì)胞生長(zhǎng)繁衍提供關(guān)鍵養(yǎng)分與適宜環(huán)境。掌握其正確使用方法,才能讓細(xì)胞蓬勃生長(zhǎng),助力科研突破與產(chǎn)業(yè)革新。開啟培養(yǎng)前,依據(jù)細(xì)胞種類、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮Y選培養(yǎng)基,如貼壁生長(zhǎng)的癌細(xì)胞系多用含血清、葡萄糖、氨基酸及多種生長(zhǎng)因子的RPMI-1640培養(yǎng)基;原代細(xì)胞培養(yǎng)常選營(yíng)養(yǎng)成分豐富、成分貼近體內(nèi)環(huán)境的DMEM培養(yǎng)基,且需添加適量抗生素,像青霉素、鏈霉素,防止微生物“偷襲”,搭建安全“保育箱”。配制環(huán)節(jié)嚴(yán)格按說明書稱取培養(yǎng)基粉末,溶解于超純水中,用...
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原代心肌細(xì)胞間質(zhì)并非單一物質(zhì),而是由多種成分巧妙交織而成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。其中,膠原蛋白是極為重要的組成部分。它如同堅(jiān)韌的繩索,為心肌細(xì)胞提供穩(wěn)固的支撐框架。在心臟每一次有力的搏動(dòng)中,膠原蛋白承受著巨大的機(jī)械應(yīng)力,確保心肌細(xì)胞不會(huì)因過度拉伸或扭曲而受損,維持著心臟結(jié)構(gòu)的完整性,使其能夠在漫長(zhǎng)的生命周期中持續(xù)穩(wěn)定地工作。彈性纖維也在其中扮演著重要角色。它們賦予心肌組織一定的彈性和回縮力。當(dāng)心臟收縮時(shí),彈性纖維被拉伸儲(chǔ)存能量;而當(dāng)心臟舒張時(shí),又能釋放能量輔助心臟恢復(fù)到原來的形狀,讓心臟...
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在醫(yī)學(xué)與生物學(xué)的廣闊天地中,耐藥細(xì)胞株的構(gòu)建為科研人員照亮了探索疾病治療新路徑的方向。耐藥細(xì)胞株,即對(duì)特定藥物具有抗藥性的細(xì)胞集合,其構(gòu)建過程復(fù)雜而精細(xì),是科研探索中的重要一環(huán)。構(gòu)建耐藥細(xì)胞株的步驟是選擇合適的細(xì)胞模型。這些細(xì)胞通常應(yīng)與研究目標(biāo)緊密相關(guān),如人體腫瘤細(xì)胞、病原體或某種特定疾病的細(xì)胞模型。選擇恰當(dāng)?shù)募?xì)胞模型,是確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的基礎(chǔ)。接下來,是藥物誘導(dǎo)耐藥性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。科研人員會(huì)將選定的細(xì)胞暴露于低劑量的藥物中,讓它們逐漸適應(yīng)并產(chǎn)生耐藥性。這一過程需...
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在生物醫(yī)學(xué)研究與生物技術(shù)發(fā)展的廣袤天地里,細(xì)胞培養(yǎng)瓶宛如一座微型的“生命搖籃”,孕育著無數(shù)科學(xué)探索的希望與可能。細(xì)胞培養(yǎng)瓶的設(shè)計(jì)精妙而科學(xué)。它通常采用透明、無毒且具有良好透氣性的塑料材質(zhì)制成,瓶身線條流暢,便于在顯微鏡下觀察和操作。其內(nèi)部空間經(jīng)過精心規(guī)劃,底部平整且面積適中,為細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)提供了理想的“棲息地”。瓶口則配備了緊密貼合且易于開啟的蓋子,既能有效防止外界微生物的入侵,又能保證細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氣體交換順暢進(jìn)行。此外,一些先進(jìn)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶還具備特殊的表面處理技術(shù),如涂...
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